Abstract
We established a precise and accurate high‑performance liquid chromatographic method for the simultaneous assay of phenytoin, phenobarbital and carbamazepine, using aprobarbital as internal standard. Whole‑blood samples are used for the analysis and solid‑phase extraction is applied for sample pretreatment. Samples of 10 µl are injected onto a 4 µm Novapak C18 column (3.9×300 mm) with a column temperature of 40 °C. The drugs are eluted with a mobile phase containing potassium phosphate buffer (pH 7.0), acetonitrile and methanol (110:50:30, v/v/v) at a flow rate of 0.5 ml/min. Signals are monitored by a photodiode‑array detector at 210 nm with a bandwidth of 10 nm. These three antiepileptic drugs and their principal metabolites are well separated within 15–20 minutes. Within‑day coefficients of variation are between 9.4 and 13.8 and between‑day coefficients between 4.11 and 11.94. Recovery ranges from 60 to 125 %. The method allows evaluation of forensic blood samples for detection and quantitation of these drugs.
Se desarrolló y validó una metodología para la cuantificación simultánea de la fenitoína, el fenobarbital y la carbamazepina por HPLC utilizando aprobarbital como estándar interno. La matriz biológica empleada fue sangre entera y la extracción se realizó en fase sólida. Muestras de 10 µl fueron inyectadas sobre una columna Novapak C18 de 3,9×300 mm con un tamaño de partícula de 4 µm y a una temperatura de 40 °C. La fase móvil utilizada está compuesta de buffer de fosfatos pH 7,0, acetonitrilo y metanol (110:50:30, v/v/v) a un flujo de 0,5 ml/min. Las señales fueron monitoreadas por un detector de arreglo de diodos a una longitud de onda de 210 nm con un ancho de banda de 10 nm. Esta metodología permite la separación de los tres fármacos, sus principales metabolitos y el estándar interno en 15 minutos. Los coeficientes de variación dentro del día están entre 9,4 y 13,8 y entre días entre 4,11 y 11,94. Los porcentajes de recuperación varían entre 60 y 125 %. Este método tiene un límite de detección de 1,66 µg/ml para la fenitoína y el fenobarbital y de 1 µg/ml para la carbamazepina, y un límite de cuantificación de 5 µg/ml para la fenitoína y el fenobarbital y de 3 µg/ml para la carbamazepina. La linealidad se observó entre 5 y 100 µg/ml para fenitoína y fenobarbital y entre 3 y 60 µg/ml para carbamazepina. La metodología desarrollada permite la evaluación de muestras forenses de sangre para la detección y cuantificación de los fármacos mencionados.
Se desarrolló y validó una metodología para la cuantificación simultánea de la fenitoína, el fenobarbital y la carbamazepina por HPLC utilizando aprobarbital como estándar interno. La matriz biológica empleada fue sangre entera y la extracción se realizó en fase sólida. Muestras de 10 µl fueron inyectadas sobre una columna Novapak C18 de 3,9×300 mm con un tamaño de partícula de 4 µm y a una temperatura de 40 °C. La fase móvil utilizada está compuesta de buffer de fosfatos pH 7,0, acetonitrilo y metanol (110:50:30, v/v/v) a un flujo de 0,5 ml/min. Las señales fueron monitoreadas por un detector de arreglo de diodos a una longitud de onda de 210 nm con un ancho de banda de 10 nm. Esta metodología permite la separación de los tres fármacos, sus principales metabolitos y el estándar interno en 15 minutos. Los coeficientes de variación dentro del día están entre 9,4 y 13,8 y entre días entre 4,11 y 11,94. Los porcentajes de recuperación varían entre 60 y 125 %. Este método tiene un límite de detección de 1,66 µg/ml para la fenitoína y el fenobarbital y de 1 µg/ml para la carbamazepina, y un límite de cuantificación de 5 µg/ml para la fenitoína y el fenobarbital y de 3 µg/ml para la carbamazepina. La linealidad se observó entre 5 y 100 µg/ml para fenitoína y fenobarbital y entre 3 y 60 µg/ml para carbamazepina. La metodología desarrollada permite la evaluación de muestras forenses de sangre para la detección y cuantificación de los fármacos mencionados.
Description
Facultad: FACULTA DE CIENCIAS DEPARTAMENTO DE FARMACIA. Tipo de pasta: encuadernado (Argollado). Color de la pasta: MORADO ARGOLLADO. Impresión: A dos caras.